SURE2 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學感受態細胞

產品標簽：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats正向重復片段；Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列；Stratagene;

產品訂購：更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，

產品組分：

菌株描述

SURE2菌株是Agilent (Stratagene) SURE菌株的高效衍生菌，特別設計用于克隆在傳統的大腸桿菌中 “無法克隆”的某些DNA  p段。SURE菌株破壞了重組酶系統整條通路上的組分，這些組分能催化重組和刪除體內的非標準二級和三級結構，包括十字形（由反向重復序列引起）和Z字形的DNA，經常出現在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆進入傳統大腸桿菌菌株中。SURE2菌株含限制缺陷（McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-），使其無法對外源DNA進行標記和限制，從而提高外源甲基化DNA的克隆效率。

也含內切酶缺陷（endA），和重組缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的穩定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15使菌株適用于藍白斑。SURE2菌株本身含卡那mei素、四環素和氯mei素特性。

SURE2菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr].

產品描述

本品是SURE2菌株經特殊工藝制作所得的感受態細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經pUC19質粒檢測轉化效率＞1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個月轉化效率不發生改變。

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態細胞必須用干冰運輸。感受態細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時間過長，否則會減低感受態細胞的轉化效率。

2） 最好在冰上融化感受態細胞。

3） 進行轉化操作時，需在相應溫度及無菌條件下進行。

4） 轉化高濃度質粒或高效率連接產物可相應降低最終用于涂板的菌量。

5） 菌株本身含卡那mei素、四環素和氯mei素特性，攜帶此三種抗性的質粒不適合克隆到SURE2細胞。SURE2菌株能耐受＜40μg/ml氯mei素，但對100μg/ml 氯mei素很敏感。

6） 為防止轉化實驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

7） 產品包裝內含質粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實驗用。

8） 要想獲得大量高純度質粒，建議在TB培養基中搖菌培養（以pUC19為例，在TB培養液中過夜培養的菌體濃度和質粒產率是LB培養液的3~4倍，S.O.C培養液的~2倍）。

9） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

常規操作流程【所有操作均在無菌條件的標準下進行】

1） 從-80℃取出感受態細胞，迅速插入冰中5min待其融化。

2） 向融化的感受態細胞中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），用手輕彈混勻（避免用移液槍上下吹打），冰浴靜置25min。

3） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過程不要搖動離心管。

4） 向每個離心管中加入700 μl無菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5） 5000rpm離心1min，留取100μl左右輕輕吹打重懸菌體，加到含相應抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃過夜培養。

【注意】：a）涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多，可取少量轉化產物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，可將所有轉化產物涂布平板。b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少， 

附表1固體和液體LB培養基配方

附表2固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。